Стойкость антител и бустерные реакции на вакцину против птичьего гриппа Split-Virion H5N1 у молодых и пожилых людей

1. Аннотация Птичий грипп продолжает циркулировать и остается глобальной угрозой здоровью не в последнюю...
2. методы
3. Дизайн исследования
4. Участники исследования
5. Процедуры обучения
6. Бустерные вакцины
7. Анализ безопасности и реактогенности
8. Ответ антител
9. Статистический анализ
10. Результаты
11. Безопасность и реактогенность
12. Таблица 1
13. иммуногенность
14. Таблица 2
15. Бустер и первичные ответы
16. Таблица 3
17. Таблица 4
18. Таблица 5
19. обсуждение
20. Постоянство антител
21. Перекрестный иммунитет

Аннотация

Птичий грипп продолжает циркулировать и остается глобальной угрозой здоровью не в последнюю очередь из-за связанной с этим высокой смертности. В этом исследовании сравнивались устойчивость антител, бустерная вакцина и перекрестный иммунный ответ между двумя вакцинами против гриппа A (H5N1). Участники в возрасте старше 18 лет, которые ранее были иммунизированы вакциной A / Вьетнама по кладе 1, были повторно иммунизированы через 6 месяцев 7,5 мкг гомологичного штамма или через 22 месяца вакциной 2 с добавлением квасцов, A Индонезийская вакцина. Забор крови через 6, 15 и 22 месяца после первичного курса использовали для оценки персистенции антител. Концентрации антител через 6 месяцев после первичной иммунизации вакциной A / Вьетнам 30 мкг квасцов с вакциной с добавлением квасцов или 7,5 мкг вакцины были ниже, чем через 21 день после первичного курса, и со временем снижались. Повторная иммунизация с помощью клады 2, 30 мкг квасцовой вакцины, подтвержденной квасцами, подтвердила перекрестную реактогенность. Перекрестная реактивность антител между кладами A (H5N1) позволяет предположить, что в принципе стратегия первичной вакцинации может обеспечить как раннюю защиту в начале пандемии, так и улучшенные ответы антител на специфическую вакцинацию, когда она станет доступной.

Регистрация испытания : ClinicalTrials.gov {"тип": "клиническое испытание", "атрибуты": {"текст": "NCT00415129", "term_id": "NCT00415129"}} NCT00415129

Вступление

Первая пандемия гриппа 21-го века в 2009 году была вызвана новым штаммом гриппа A (H1N1), который был впервые признан в Мексике [ 1 ], а не штаммом A (H5N1), как ожидалось. Однако угроза, создаваемая вирусами птичьего гриппа, включая вирусы A (H5N1), сохраняется.

В некоторых частях Африки и Азии вирус A (H5N1) является энзоотическим, что приводит к регулярным вспышкам среди домашней птицы и диких птиц. Случаи A (H5N1) среди людей достигли своего пика в 2006 году, но новые случаи продолжают диагностироваться, и на сегодняшний день Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) было сообщено о 844 подтвержденных инфекциях [ 2 ]. В то время как пандемический штамм гриппа A (H1N1) 2009 года имел смертность, очень похожую на смертность от сезонного гриппа, смертность, связанная с птичьими вирусами A (H5N1) и A (H7N9), составляет приблизительно 60% и 30% соответственно [ 2 ]. Более высокий уровень смертности, связанный с птичьим гриппом, частично объясняется отсутствием ранее существовавшего иммунитета против вирусов птичьего гриппа в популяции людей. Этот недостаток ранее существовавшего иммунитета также объясняет плохую реакцию антител на вакцины против A (H5N1).

Спорадическая передача вируса гриппа (H5N1) среди близких домохозяйств наблюдалась, но устойчивая передача от человека человеку еще не сообщалась [ 3 ]. Пять ключевых мутаций аминокислотных генов, которые были продемонстрированы при прохождении вируса через хорьков, достаточны для того, чтобы сделать вирус более передаваемым. Поэтому необходима постоянная бдительность и необходимо поддерживать планы готовности [ 4 ]. Вспышка гриппа A (H1N1) в 2009 году выявила недостатки существующих планов обеспечения готовности, в частности неспособность сообщества в целом быстро реагировать на возникновение новой пандемии и неспособность разработать, изготовить и доставить эффективную вакцину для целевое население во времени. Две основные проблемы в разработке и реализации стратегии пандемической вакцины против A (H5N1) предполагают появление антигенных вариантов в результате антигенного дрейфа и преодоление слабой иммуногенности из-за отсутствия ранее существовавшего иммунитета. Обе проблемы могут быть решены с помощью предпандемической вакцины, чтобы очистить население до пандемии. Эта стратегия основана на двух допущениях: во-первых, примирование популяции пандемической вакциной будет индуцировать и поддерживать перекрестно-реактивные антитела, которые будут обеспечивать защиту от пандемического вируса до того, как вакцина против пандемического штамма станет доступной, и во-вторых, что усиление с помощью пандемической вакцины, подобранной по штамму, даст более быстрые, более высокие и более перекрестные защитные ответы антител в праймированных по сравнению с не праймированной популяцией [ 5 - 7 ].

В этом исследовании персистенция антител, бустерный ответ и перекрестный ответ у взрослых, которые ранее были вакцинированы двумя дозами высокодозовой вакцины с низкой дозой 1A (H5N1) с добавлением квасцов или неадъювантной низкой дозы, были оценены после повторной иммунизации низкодозированная вакцина, не содержащая адъювантов, содержащая исходный вакцинный штамм или высокодозовый адъювантный штамм клад 2.

методы

Бустерная иммунизация была проведена в открытом исследовании фазы 2. Первичная фаза была проведена в период с мая по декабрь 2006 года, и ранее сообщалось [ 8 ]. Этот вторичный этап проводился в период с декабря 2006 года по октябрь 2008 года.

Первичное исследование было проведено на 4 исследовательских площадках в Европе, тогда как бустерное исследование проводилось на 3 из этих 4 площадок.

Дизайн исследования

В ранее сообщенном рандомизированном открытом неконтролируемом исследовании фазы 2 600 взрослых (разделенных поровну между двумя возрастными группами: от 18 до 60 лет и старше 60 лет) были рандомизированы для получения 2 доз (D0, D21) вакцины H5N1 clade 1 содержащий либо 7,5 мкг гемагглютинина без адъюванта, либо 30 мкг с 600 мкг гидроксида алюминия [Al3 +] в качестве адъюванта [ 8 ].

Бустерное исследование, представленное здесь, проводилось в 2 этапа. Группа участников в одном месте исследования (n = 154) получила бустерную дозу вакцины Клад 1 1 7,5 мкг (H5N1) через 6 месяцев после первичного курса иммунизации вакциной Клад 1 1 7,5 мкг (H5N1), либо без адъювант или с 30 мкг квасцов. На более поздней стадии и в 2 из 3 оставшихся участков субъекты, которым была введена две дозы 30 мкг квасцы с адъювантом, были приглашены для участия в бустерном исследовании, что подразумевало, что они получили одну бустерную иммунизацию высокой дозой (30 мкг) вакцины A (H5N1) с квасцами 2 (H5N1), квасцы 2, через 22 месяца после первичной иммунизации (). Более подробная информация о дизайне исследования доступна в Файл S1 протокол клинических испытаний.

NC: несоблюдение протокола; SAE: серьезное неблагоприятное событие; WD: добровольный вывод по неуказанным причинам; LFU: потерян, чтобы следить.

Для оценки устойчивости антител всем участникам было предложено пройти анализ крови через 6 месяцев после начала исследования. После этого всем участникам, которые не получали бустерную вакцину через 6 месяцев, было предложено пройти анализ крови для оценки стойкости антител через 15 и 22 месяца.

В одном месте исследования, параллельно с 22-месячной бустерной иммунизацией клавой 2, дополнительно 50 A (H5N1) вакцинированных взрослых, в возрасте от 18 до 60 лет, были набраны для получения первичного курса той же вакцины клавы 2, которая использовалась как бустер. Эти участники получили 2 дозы вакцины с интервалом в три недели.

Участники исследования

Взрослые, которые ранее участвовали в первичном исследовании, были приглашены принять участие в последующей фазе и бустере [ 8 ]. Следующие критерии исключения были использованы для всех участников, которые принимали участие в бустерной фазе исследования: системная гиперчувствительность к любому компоненту вакцины или опасная для жизни реакция после предыдущих вакцин; врожденный или приобретенный иммунодефицит или получение иммуносупрессивной терапии, такой как противораковая химиотерапия или длительная системная терапия кортикостероидами (в течение более 2 последовательных недель в течение последних 3 месяцев до посещения); получение препаратов крови в течение последних 3 месяцев; вакцинация в течение 4 недель до пробной вакцинации или плановая вакцинация в течение 4 недель после любой пробной вакцинации; беременность (подтвержденная положительным анализом мочи) или серьезное неблагоприятное событие, связанное с пробной вакциной после вакцинации. Для 50 наивных участников, набранных для получения клады 2 в качестве первичной вакцинации, применялись следующие дополнительные критерии исключения: хроническое заболевание, которое могло помешать проведению или завершению испытания; предыдущая вакцинация вакциной против птичьего гриппа; запланированное или недавнее участие в другом клиническом испытании; нарушение свертываемости крови, запрещающее внутримышечные инъекции, или лихорадочное заболевание в день включения.

Исследование было одобрено институциональными советами по этике в каждом участвующем бельгийском учреждении (университеты Антверпена, Гента и Левена) и Оксфордским комитетом по этике Национальной службы здравоохранения для оксфордского сайта., Исследование проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией. и хорошая клиническая практика. Письменное информированное согласие было получено от всех участников до зачисления в эту часть исследования. Испытание зарегистрировано в Clinicaltrials.gov: {"тип": "клиническое испытание", "атрибуты": {"текст": "NCT00415129", "term_id": "NCT00415129"}} NCT00415129 ,

Процедуры обучения

Забор крови

Для оценки персистенции антител через 6, 15 и 22 месяца в разных группах участников было отобрано до 30 мл крови, как описано выше. Для тех, кто получил бустерную иммунизацию через 6 месяцев, брали образцы крови до и через 21 день после иммунизации. Для тех, кто получил 22-месячную бустерную иммунизацию, брали образцы крови непосредственно перед бустерной иммунизацией и через 7 и 21 день после иммунизации. 7-дневная кровь была взята для поиска признаков раннего ответа, предполагающего наличие иммунологической памяти. Наконец, у тех, кто был иммунизирован двухдозовой схемой вакцины клады 2 в качестве основного курса, брали образцы крови перед каждой иммунизацией и через 21 день после второй дозы.

Бустерные вакцины

Вакцины представляли собой инактивированные сплит-вирионные препараты вакцинных штаммов; Клайд 1: A / Vietnam / 1194/2004 / NIBRG-14 (H5N1) (7,5 мкг НА без адъюванта) или Клайд 2: A / Indonesia / 5/05-RG2 (H5N1) (30 мкг с Al (ОН) 3) , размножается в зародышах яиц. Доза Al (0H) 3, используемая в качестве адъюванта, составляла 600 мкг / доза (выраженная как содержание Al3 +). Оба препарата были представлены в готовых к употреблению флаконах с несколькими дозами, из которых 0,5 мл были извлечены и внутримышечно введены в дельтовидную мышцу с помощью стандартного шприца и иглы 25 G, 25 мм.

Анализ безопасности и реактогенности

После каждой иммунизации участников наблюдали в течение 30 минут на предмет немедленных реакций. Участники вели дневники, в которых записывали любые запрошенные (предварительно внесенные в список) местные или системные реакции, которые происходили в течение 7 дней после иммунизации. В частности, участников попросили записать индукцию в месте инъекции, экхимоз в месте инъекции, температуру, недомогание и дрожь в течение 3 дней после вакцинации. Участников также попросили записать любое другое неблагоприятное событие, которое произошло в течение 21 дня после иммунизации. Серьезные нежелательные явления были собраны на протяжении всего исследования. Участники наблюдались от 7 до 28 месяцев (12 месяцев для группы, получающей бустер 1 A (H5N1) / Вьетнам), 22 месяца для участников, которые принимали участие только в первичной фазе исследования, 28 месяцев для участников, которые получили бустера 2 A / Индонезия, бустер в 22 месяца и 7 месяцев для 50 дополнительных участников, грунтованных с блокадой 2 A (H5N1N) / Индонезия.

Ответ антител

Образцы сыворотки использовали для титрования антител против одного из вакцинных штаммов (клада 1 или клада 2) с использованием анализов ингибирования гемагглютинации (HI) и серонейтрализации (SN).

Анализ HI отражает способность специфических антител против вируса гриппа ингибировать гемагглютинацию эритроцитов вирусом гриппа, как описано ранее [ 8 ]. Вкратце, HI-анализы проводили на серийных двукратных разведениях всех доступных образцов с использованием конских эритроцитов (нижний предел обнаружения 1: 8; серореактивный порог 1:32).

Анализ SN основан на способности антител ингибировать инфекцию клеточной культуры почек собачьей почки (MDCK) в Madin-Darby, как описано ранее [ 8 ]. Вкратце, инактивированную человеческую сыворотку инкубировали с вирусом, затем добавляли к культуре клеток MDCK. После инкубации в течение ночи для определения степени заражения MDCK использовали иммуноферментный анализ. Нижний уровень обнаружения этого анализа был 1:20.

Во всех анализах образцы тестировали в двух экземплярах, и анализируемый титр представлял собой среднее геометрическое для дубликатов, выраженное как обратное значение разведения. Образцам без обнаруживаемой активности антител был присвоен титр от половины предела обнаружения анализа. Эти анализы были выполнены в слепых условиях в лабораториях общественного здравоохранения Англии (Колиндейл, Лондон, Великобритания).

Статистический анализ

Размер выборки для дополнительных участников, получавших серию первичной вакцинации вакциной A 2 (H5N1) / Индонезия клады 2, был произвольно установлен на 50 субъектов. Размер выборки, необходимый для определения ответной реакции бустера на группу 2 A (H5N1) / Индонезия, считался меньшим, чем первоначальный размер когорты, поскольку только половина первоначального исследуемого населения имела право продолжать участие в исследовании, т.е. те, кто получил более высокую оценку Доза вакцины на начальном этапе. Соответственно, участники центра 4 не были приглашены принять участие в бустерной фазе исследования. Минимальные наборы данных, лежащие в основе результатов, доступны заинтересованным исследователям, которые в первую очередь могут запросить доступ к анонимным данным на уровне пациентов и документам клинического исследования по адресу www.clinicalstudydatarequest.com , Если требуется дополнительная помощь, необходимо связаться с соответствующим автором.

Исследование было описательным, и никаких формальных статистических сравнений между группами не проводилось. Результаты представлены с 95% доверительными интервалами точечных оценок, рассчитанными с использованием нормальной аппроксимации для количественных данных и точного биномиального распределения (метод Клоппера-Пирсона) для пропорций. Население, проанализированное для всех представленных здесь моментов времени, является полным набором анализа. Анализ по протоколу был предварительно назначен для группы, не получавшей вакцину A (H5N1), получавшей первичный курс с вакциной 2-й группы, однако в этой группе не было отклонений в протоколе, поэтому протокол и набор для полного анализа были эквивалентны. Для групп, которые получили любую бустерную вакцинацию, полный набор анализа определяется как все те, кто получил бустерную иммунизацию. Анализ включал все данные, доступные в каждый момент времени.

Данные HI выражаются в виде GMT ​​по критериям, основанным на критериях, определенных для метода HI Комитетом по лекарственным средствам для человека (CHMP) для вакцин против сезонного гриппа, которые применяются к пандемическим вакцинам в отсутствие конкретных альтернативных критериев. Этими критериями являются: уровень серозащиты (% с титрами HI ≥ 40 дил-1) более 70%; уровень сероконверсии или значительное увеличение титра (титр до вакцинации <8 и титр после вакцинации ≥ 32, или ≥ 4-кратное увеличение титра между до и после титров) более 40% и увеличение отношения геометрического среднего титра ( GMTR) между титром до и после вакцинации более 2,5. У взрослых старше 60 лет эти критерии изменяются на уровень серозащиты более 60%, уровень сероконверсии или значительное увеличение титра более 30% и GMTR более 2 [ 9 ]. Рекомендуется также оценить устойчивость антител, чтобы помочь в проведении практики повторной иммунизации, однако формальных критериев иммуногенности не предусмотрено. Здесь представлены только данные, относящиеся к HI-антителам.

Анализы были выполнены отделом биостатистики Sanofi Pasteur, Marcy I'Etoile, Франция, с использованием программного обеспечения SAS версии 8.2 (SAS Institute, Cary NC, США)) и были независимо подтверждены Oxford Vaccine Group, Оксфордский университет, с использованием SAS версии 9.3. (М. В.).

Результаты

Через 6 месяцев после начала начальной фазы исследования 587 из первоначальных 600 участников оставались в праве продолжить участие в исследовании (). За 6-месячный 7,5 мкг бустерной руки 155 участников завершили исследование к этому моменту. За 22 месяца, клана 2, 30 мкг квасцов с добавлением бустерной руки 118 участников завершили исследование к этому моменту. Персистентность антител после первичной вакцинации оценивалась через 6, 15 и 22 месяца у 587, 409 и 192 участников соответственно. Дополнительную информацию о процедурах, выполняемых при каждом ознакомительном посещении, можно найти в S1 Fig (пробные графики), что дополняет.

Безопасность и реактогенность

В общей сложности 33 серьезных побочных эффектов (SAEs) были зарегистрированы в этой фазе исследования, то есть до 42 дней после начала исследования. SAEs, которые произошли в первичной фазе, сообщаются в первичной фазе публикации [ 8 ]. Не наблюдалось SAE в течение 21 дня после получения вакцинации с усилением или первичной вакциной 2-й степени. Ни один из SAEs не рассматривался исследователями как связанный с вакцинацией.

В течение 21 дня после введения бустерной дозы вакцины Клад 1А (H5N1) / Вьетнам 7,5 мкг процент взрослых в возрасте от 18 до 60 лет, сообщивших, по крайней мере, об одной побочной реакции, составлял 50% у тех, кто принимал вакцину с высокой дозой адъюванта и 35,9% в тех, кто воспользовался низкой дозой неадъювантной вакцины. У взрослых в возрасте старше 60 лет, по крайней мере, одно запрошенное событие было зарегистрировано у 19,5% и 27,8% в группах с высокой и низкой дозировкой, соответственно.

До 21 дня после бустерной иммунизации высокодозированной квасцы А / Индонезия с вакциной с квасцами 2 А в Индонезии 74,6% взрослых в возрасте от 18 до 60 лет сообщили, по крайней мере, об одной запрошенной реакции в месте инъекции и 42,4%, по крайней мере, об одной запрошенной системной реакции, тогда как 36,8% и 33,3% лиц старше 60 лет сообщили, по крайней мере, об одном месте проведения инъекции и о системной реакции соответственно.

Наиболее частыми реакциями в обеих группах были боль в месте инъекции, головная боль и недомогание, которые начались в течение 3 дней после вакцинации. Нежелательные реакции, начавшиеся через 21 день, считались не связанными с вакциной. Разбивка по типу реакций в первые 7 дней после иммунизации приведена в.

Таблица 1

Запрашиваемые побочные эффекты после повторной вакцинации или в случае первичной вакцинации по клетке 2 в течение 3-7 дней после вакцинации.

Возрастные группы 18–60 лет> 60 лет 18–60 лет Доза первичной вакцины 7,5 мкг (n = 39) 30 мкг + адъювант (n = 38) 30 мкг + адъювант (n = 60) 7,5 мкг (n = 36) 30 мкг + Адъювант (n = 41) 30 мкг + Адъювант (n = 58) Нет предыдущей вакцины против H5N1 (n = 50). Бустерная доза 7,5 мкг. CI% 95% CI% 95% CI% 95% CI% 95% CI% 95% CI% 95% CI Реакции в месте инъекции Боль 20,5 9,3; 36,5 28,9 15,4; 45,9 61 47,4; 73,5 8,3 1,8; 22,5 7,3 1,5; 19,9 28,1 17,0; 41,5 44 30; 58,7 Эритема 12,8 4,3; 27,4 13,2 4,4; 28,1 25,4 15,5; 38,4 2,8 0,1; 14,5 0,0 0,0; 8,6 12,3 5,1; 23,7 10 3,3; 21,8 набухание 0 0; 9,0 2,6 0,1; 13,8 15,3 3,2; 27 5,6 0,7; 18,7 0,0 0,0; 8,6 8,8 2,9; 10,3 8 2,2; 19,2 Индикация * 7,7 1,6; 20,9 2,6 0,1; 13,8 25,4 15; 38,4 0,0 0,0; 9,7 0,0 0,0; 8,6 8,8 2,9; 10,3 14 5,8; 26,7 Экхимоз * 0,0 0,0; 9,0 0,0 0,0; 9,3 5,1 1,1; 14,1 0,0 0,0; 9,7 2,4 0,1; 9,7 5,2 1,9; 10,9 2 1,3; 16,5 Системные реакции Лихорадка * 0,0 0,1; 12,9 2,6 01; 13,8 3,4 0,4; 11. 7 2,8 0,1; 14,5 2,4 0,1; 12,9 5,3 1,1; 14,6 4 0,5; 13,7 Головная боль 17,9 7,5; 33,5 18,4 7,7; 34,3 30,5 19,2; 43,9 13,9 4,7; 29,5 9,8 2,7; 23,1 19,3 10; 31,9 26 14,6; 40,3 недомогания * 5,1 0,6 ; 17,3 7,9 1,7; 21,4 16,9 8,4; 29 2,8 0,1; 14,5 2,4 0,1; 12,9 10,5 4,0; 21,5 16 2,2; 19,2 Миалгия 5,1 0,6; 17,3 7,9 1,7; 21,4 18,6 9,7; 30,9 5,6 0,7; 18,7 4,9 0,6; 16,5 10,5 4,0; 21,5 10 1,3; 21,8 дрожь * 0,0 0,0; 9,0 5,3 0,6; 17,7 6,8 1,9; 16,5 0,0 0,0; 9,7 0,0 0,0; 8,6 5,3 1,1; 14,6 6 0,0; 7,1

В наивной группе (18–60 лет), которая получала первичный курс вакцины клады 2A (H5N1) / Индонезия, SAE не было зарегистрировано. В общей сложности 72% участников испытали запрошенную реакцию в течение 21 дня после иммунизации. Боль в месте инъекции и головная боль были наиболее частыми реакциями в первые 7 дней после иммунизации ().

иммуногенность

Стойкость антител

Через 6 месяцев после первичной иммунизации вакциной Клад-1А (H5N1) / Вьетнам 7,5 мкг процент людей, у которых уровни антител превышали порог серопротекции (определяемый как титр HI-антител ≥ 32), составлял 6,2% в возрасте от 18 до 60 лет. группа и 14,4% в группе старше 60 лет ().

Таблица 2

Персистентность антител, определенная по титру HI-антител через 6/15/22 месяцев после первой вакцинации кладой 1 A / Vietnam / 1194/2004 / NIBERG-14.

Возрастные группы 160 лет> 60 лет Первичная вакцинация 7,5 мкг 30 мкг + адъювант 7,5 мкг 30 мкг + время адъюванта (месяцы) с момента вакцинации 6 (n = 146) 6 (n = 146) 15 (n = 98) 22 (n = 95) ) 6 (n = 146) 6 (n = 148) 15 (n = 101) 22 (n = 94) % субъектов с GMT ≥ 32 (95% ДИ) 6,2 (2,9; 11,4) 6,2 (2,9; 11,4) 3,1 ( 0,6; 8,7) 1,1 (0,0; 5,7) 14,4 (9,1; 21,1) 18,9 (13,0; 26,2) 12,9 (7,0; 21) 11,7 (6,0; 20) GMT (95% CI) 5,43 (4,85; 6,08) 5,99 (5,33; 6,73) 4,6 (4,20; 5,06) 4,33 (4,03; 4,66) 7,63 (6,41; 9,08) 9,42 (7,78; 11,42) 6,8 (5,55; 8,30) 6,37 (5,22; 7,76)

В группе, получившей 30 мкг адъювантной вакцины 1A (H5N1) / Вьетнам, 6,2% участников в возрасте от 18 до 60 лет и 18,9% участников в возрасте старше 60 лет имели титры HI> 32. И снова эти уровни со временем снижались () ,

Бустер и первичные ответы

Ускоренный ответ на 7,5 мкг вакцины Клад 1 А / Вьетнам через 6 месяцев ().

Таблица 3

21-дневный бустерный ответ на 7,5 мкг клэда 1 A / Vietnam / 1194/2004 / NIBERG-14 через 6 месяцев после первой вакцинации.

Возрастная группа от 18 до 60 лет> 60 лет. Доза первичной вакцины 7,5 мкг (N = 39) 30 мкг + адъювант (N = 38) 7,5 мкг (N = 36) 30 мкг + адъювант (N = 41). Порог EMA по Гринвичу (95%). ХИ) Нет 8,67 (6,32; 11,89) 9,96 (7,17; 13,82) 11,53 (7,56; 17,59) 18,8 (12,5; 28,3) GMTR (95% ДИ)> 2,5 1,59 (1,22; 2,06) 1,45 (1,21; 1,75) GMTR (95 % ДИ)> 2 # 1,31 (1,06; 1,62) 1,34 (1,09; 1,67) Сероконверсия *% (95% ДИ)> 40% 10,3 (2,9; 24,2) 2,6 (0,1; 13,8) Сероконверсия *% (95% ДИ)> 30% # 2,8 (0,1; 14,5) 9,8 (2,7; 23,1) Серозащитная защита (титр ≥ 40)% (95% ДИ)> 70% 12,8 (4,31; 27,4) 13,2 (4,4; 28,1) Серозащитная защита (титр ≥ 40)% ( 95% ДИ)> 60% # 19,4 (8,2; 36,0) 29,3 (16,1; 45,5)

Ответ на эту бустерную вакцину через 6 месяцев после первичной иммунизации, измеренный антителом HI, не соответствовал ни одному из критериев CHMP ни в одной из двух возрастных групп.

Ускоренный ответ на 30 мкг с помощью адъювантной вакцины 2A / Индонезия через 22 месяца ().

Таблица 4

Усиление ответа на 30 мкг адъювантной вакцины clade 2 / Indonesia / 5/05-RG2 через 22 месяца после первой вакцинации.

От 18 до 60 лет> 60 лет Штамм использовался для проверки ответа Клайд 1 (Вьетнам) Клайд 2 (Индонезия) Клайд 1 (Вьетнам) Клайд 2 (Индонезия) Порог EMA Время после вакцинации (дни) N = 59 N = 59 N = 57 N = 57 GMT (95% CI) Нет 7 12,1 (9,35; 15,8) 12,6 (9,56; 16,5) 8,25 (6,25; 10,9) 6,16 (5,02; 7,56) 21 14,4 (10,8; 19,2) 15,2 (11,3; 20,3) 10,7 (7,71). ; 14,9) 9,84 (7,06; 13,7) GMTR (95% ДИ)> 2,5 или> 2 # 7 2,93 (2,28; 3,77) 3,07 (2,34; 4,03) 1,54 (1,25; 1,90) 1,49 (1,21; 1,82) 21 3,47 (2,63). ; 4,59) 3,71 (2,78; 4,94) 2,01 (1,50; 2,71) 2,39 (1,72; 3,33) Сероконверсия *% (95% ДИ)> 40% или 30% # 7 27,1 (16,4; 40,3) 28,8 (17,8; 42,1) 12,5 (5.2; 24.1) 8,9 (3,0; 19,6) 21 39 (26,5; 52,6) 42,4 (29,6; 55,9) 17,9 (8,9; 30,4) 21,4 (11,6; 34,4) GMTtitre ≥ 32% (95% ДИ)> 70% или> 60% # 7 27,1 (16,4; 40,3) 28,8 (17,8; 42,1) 22,8 (12,7; 35,8) 10,5 (4,0; 21,5) 21 39 (26,5; 52,6) 42,2 (29,6; 55,9) 26,3 (15,5; 39,7) 22,8 (12,7) ; 35,8)

Ответ бустера был протестирован против вирусов как 1, так и 2 типов. Через 7 дней после бустерной иммунизации GMTR был выше порога, требуемого CHMP (удовлетворяющего требованиям 1 из 3) в группе от 18 до 60 лет против штаммов как 1, так и 2, но не в возрастной группе старше 60 лет.

Через 21 день после иммунизации в возрастной группе от 18 до 60 лет 2 из 3 критериев CHMP (уровень сероконверсии и GMTR) были выполнены при тестировании против вируса клады 2, а при тестировании против вируса клады 1 был соблюден единственный критерий (GMTR). , В группе старше 60 лет единственным критерием CHMP был GMTR для обоих протестированных вирусных штаммов.

Первичный ответ на вакцину клад 2 ().

Таблица 5

Первичный ответ, следующий за разделом 2 A / Indonesia / 5/05-RG2, как определено методом HIH.

Порог EMA Время после вакцинации (дни) Первичная вакцинация 30 мкг + адъювант (n = 50) GMT (95% CI) Нет 0 4,0 (4,0; 4,0) 21 4,4 (4,08; 4,760 42 12,8 (8,84; 18,6) GMTR% (95 % ДИ)> 2,5 21 2,9 (2,08; 4,06) 42 3,20 (2,21; 4,64) % сероконверсии (95% ДИ)> 40% 21 0,0 (0,0; 7,1) 42 26,0 (14,6; 40,3)% серозащиты (титр ≥ 32) > 70% 0 0,0 (0,0; 7,1) 21 0,0 (0,0; 7,1) 42 26 (14,6; 40,3)

В наивной группе, которая получала только вакцину клады 2, до иммунизации не было доказательств предшествующего иммунитета к вирусу клады 2 А / Индонезия. Через двадцать один день после однократного введения вакцины был достигнут один критерий CHMP (GMTR более 2,5). Это не изменилось через 21 день после второй иммунизации. Демография бустера и наивной группы дана в дополнительном материале.

обсуждение

В этом исследовании изучалась потенциальная полезность стратегии первичной бустерной вакцинации с использованием двух разных штаммов вируса гриппа A (H5N1) для индукции перекрестной защиты. Данные показывают, что штамм гетерологичной бустерной вакцины может индуцировать перекрестную реактивность. Несмотря на то, что схема первичной вакцинации вызывала ответы антител, которые соответствовали критериям CHMP в некоторых группах, через 6 месяцев после того, как уровни бустерной дозы антител снизились ниже порогов CHMP, установленных для первичной вакцинации. Здесь важно подчеркнуть, что не существует критериев CHMP для продолжительности стойкости антител и степени перекрестной реактивности вакцин против гриппа. Не может быть показано, чтобы оценить ценность этой стратегии первичного повышения, используя, возможно, неподходящую систему подсчета очков [ 9 ].

Постоянство антител

Имеется несколько сообщений об устойчивости антител к вакцинам против гриппа A (H5N1), превышающих 6-месячный период, тогда как угроза пандемии может сохраняться в течение нескольких лет. Lin et al., (2009) сообщили, что через 6 месяцев после иммунизации низкими дозами антител к вакцине из цельного вириона А (H5N1) с добавлением квасцов присутствовали только от 4,8% до 20,8% взрослых в возрасте до 60 лет и, таким образом, не смогли встретить любого CHMP в этот момент времени [ 10 ]. Напротив, было продемонстрировано, что антитела, индуцированные низкой дозой вакцины против гриппа A (H5N1), приготовленной с адъювантом масло-в-воде, сохраняются на уровнях, которые соответствуют всем 3 критериям CHMP через 6 месяцев после иммунизации [ 11 ]. При непосредственном сравнении низкодозированных, неадъювантных вакцин и вакцин с добавлением эмульсии масло-в-воде последние показали более высокие титры антител, которые сохранялись гораздо дольше как у молодых, так и у пожилых людей [ 12 , 13 ].

В настоящем исследовании участники наблюдались в течение 22 месяцев после первой иммунизации, которая является самым длительным периодом наблюдения, о котором сообщалось. Через шесть месяцев после первичной вакцинации величина титров HI отличалась в большей степени по возрастной группе, чем по группе первичной вакцинации (низкие дозы, неадъювантные и высокие дозы, квасцы с адъювантами). В младшей возрастной группе 6% участников имели HI-титры, обнаруженные через 6 месяцев, независимо от типа вводимой вакцины. В старшей возрастной группе 14,4% и 18,9% имели определяемые титры HI при введении вакцины в низких и высоких дозах соответственно. Эта тенденция сохранялась в течение 22 месяцев после иммунизации и может отражать эффект предварительного праймирования посредством естественного воздействия или вакцины против сезонного гриппа в старшей группе. Фактически, даже на исходном уровне, до иммунизации A (H5N1), 16% старшей возрастной группы имели повышенные титры HI; аналогичные результаты были получены другими исследователями [ 14 , 15 ].

Перекрестный иммунитет

Вызванный вакциной перекрестный иммунный ответ определяется как способность индуцировать иммунные ответы против штаммов патогенов, которые генетически отличаются от штамма (ов), используемых для производства вакцины [ 16 ]. Практически это означает, что иммунизация вакциной, содержащей антиген (ы) из одной группы пандемического вируса, может обеспечить некоторую степень защиты от генетически различного штамма вируса. Перекрестно-реактивный иммунный ответ между вакцинами против H5N1 потенциально может позволить сэкономить дозу во время последующих волн пандемии. Перекрестная реактивность между вирусными кладками птичьего гриппа ранее была продемонстрирована с использованием вакцин, содержащих эмульсии масло-в-воде в качестве адъювантов, таких как MF59 и AS03, и вакцин из цельного вириона [ 17 - 22 ]. Первичный курс низкодозированной вакцины клады 1, содержащей индуцированные адъювантом масло-в-воде антитела против вируса клады 2, у 77% участников исследования [ 21 ]. Когда тот же самый антиген вводили без какого-либо адъюванта, перекрестно-реактивный ответ не наблюдался, что демонстрирует важность адъюванта для индукции перекрестной реактивности [ 22 ]. Wu et al., (2009) использовали двухдозовую схему вакцины из цельного вириона, содержащей квасцы-адъювант. Через двадцать восемь дней после введения второй дозы вакцины сероконверсия была проведена в отношении двух штаммов гетерологичной клады 2, протестированных более чем у 40% участников в течение 28 дней, что соответствует 1 из 3 критериев CHMP [ 23 ]. Насколько нам известно, не было проведено прямых сравнений перекрестной реактивности между вакцинами, содержащими адъюванты на основе масла в воде, и вакцинами с добавлением квасцов или квасцами с добавлением квасцов и вакцинами без адъювантов. Исследования, в которых сравнивалась иммуногенность вакцин с добавлением квасцов с вакцинами без адъювантов, свидетельствуют о том, что алюминий не улучшает иммуногенность вакцин, в частности, при использовании низких доз антигена [ 24 , 25 ]. Влияет ли присутствие квасцов на перекрестную реактивность, остается без ответа.

Основное ограничение исследования связано с более низкими, чем ожидалось, реакциями антител на низкодозированную вакцину, описанную в начальной фазе исследования [ 8 ] это означало, что только те, кто получал высокодозную вакцину с адъювантом, были приглашены на вакцинацию бустером 2-й степени. Потеря половины всех участников исследования из-за поправки к дизайну исследования означала, что не было достаточных полномочий для формального статистического анализа для вспомогательной фазы исследования, поэтому центр 4 не был включен на основании коммерческой осуществимости, чтобы позволить оставшуюся часть исследования идти один. Измененный дизайн исследования также учитывает произвольный размер выборки группы, которая получила первичную вакцинацию вакциной клады 2.

В заключение следует отметить, что перекрестная реактивность антител между кладами A (H5N1) позволяет предположить, что в принципе стратегия первичной вакцинации может обеспечить как раннюю защиту в начале пандемии, так и улучшенные ответы антител на специфическую вакцинацию, когда она станет доступной. Необходимы дополнительные критерии для оценки этой стратегии.